电影《美国派6兄弟会》延续了系列作品的幽默风格，将观众带入了一个充满笑料与情感的校园世界。故事继续讲述主人公艾瑞克（John White 饰）的大学生活，以及他与兄弟会之间的纷争和兄弟情谊的成长。

在前一部电影中，艾瑞克勇敢参加了裸奔大会，如愿升入了他梦寐以求的大学。然而，他却因为被女友甩掉而陷入了情绪低谷。在这时，他的老爸为了鼓励他，毫不吝啬地分享了自己年轻时的“桃色名单”，希望通过这种方式来鼓励艾瑞克。在新的大学生活中，男女共用卫生间的情景让艾瑞克颇感惊讶，他的生活变得更加疯狂。

影片中，艾瑞克加入了“贝塔”兄弟会，他们经常举办狂欢派对，让艾瑞克找到了一种宣泄情绪的方式。然而，贝塔兄弟会却面临着“GEK”兄弟会的挑战，由校中精英人物创办的GEK兄弟会威胁着他们的地位。为了证明自己，艾瑞克和他的兄弟们需要完成贝塔社的五十个挑战。在艾瑞克为完成任务而努力时，贝塔与GEK之间的矛盾不断升级，最终演变成了一场关乎两个兄弟会存亡的“古希腊运动会”。